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3分鐘看懂維生素D檢測試劑盒的操作步驟

點擊次數:91發布時間:2022-03-03
 
  維生素D檢測試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人維生素D(VD)獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人維*生素D(VD)正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  維生素D檢測試劑盒的操作步驟:
 
  1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
 
  2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
 
  3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
 
  4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
 
  5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
 
  6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
 
  7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
 
  8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
 
  9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
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